PCR儀溫度校準目前的使用情況
瀏覽次數:966發(fā)布日期:2022-01-19
PCR又名聚合酶鏈式反應,屬于一種分子生物學(xué)技術(shù),主要用來(lái)在短期內放大特定的DNA片段。而PCR儀重要的功能就是自動(dòng)的完成聚合霉反應,并為DNA片段的放大提供一定的溫度條件。當儀器在運行的過(guò)程中,主要分為三個(gè)特征溫度循環(huán),一種是高溫變性,具體方法是將DNA樣本加熱到90~95℃,讓其模板轉變?yōu)閱捂溄Y構;另一種是低溫退火,是將DNA樣本的溫度降到50~65℃,使之能夠與引物相結合;第三種則是適溫延伸,就是采用再次升溫至70~75℃的方法來(lái)完成新鏈的復制。由此可見(jiàn),PCR儀溫度的準確性與實(shí)驗的操作息息相關(guān)。
目前PCR儀在醫學(xué)聚合酶鏈式反應檢測中的使用平率較高,如用于親子鑒定以及個(gè)體識別等,這樣就導致了在使用的過(guò)程中各項指標有可能發(fā)生偏差,而且將后期的校準工作交給出廠(chǎng)商或者是由儀器自己進(jìn)行校準,這樣就不能保證在檢測的過(guò)程中所有數據的準確性。由于PCR儀具有升降溫速度快的特點(diǎn),因此所選用的溫度傳感器的熱慣性要小才能達到標準。因此溫度傳感器的準確性對實(shí)驗的結果也有重要的影響,一般進(jìn)行校準的方法為:溫度點(diǎn)在30度時(shí),持續1分鐘:溫度點(diǎn)在95度時(shí),持續3分鐘;溫度點(diǎn)在30度時(shí),持續2分鐘;溫度點(diǎn)在90度時(shí),持續3分鐘;溫度點(diǎn)在50度時(shí),持續3分鐘;溫度點(diǎn)在70度時(shí),持續3分鐘;溫度點(diǎn)在60度時(shí),持續3分鐘;溫度點(diǎn)在30度時(shí),持續1分鐘,再借助系統軟件將檢測的數據進(jìn)行系統分析。
PCR儀溫度校準技術(shù)是一項分子生物學(xué)檢測技術(shù),在目前的臨床檢測以及司法檢測中被大力的推廣應用,在進(jìn)行檢測的過(guò)程中會(huì )出現很多原因造成結果的不準確性,因此對其進(jìn)行定期的校準時(shí)絕對有必要的。